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    分子生物學實驗室規劃設計及凈化工程裝修要求

    分子生物學實驗室規劃設計及凈化工程裝修要求

    實驗室凈化工程裝修
    實驗室潔凈工程裝修,實驗室凈化工程設計主要是由我國空氣潔凈等級標準分為:100級、1000級、10000級、100000級等等。標準則劃分為:1級、2級、3級、4級、5級為準。

    基因擴增實驗室(PCR實驗室):
    PCR是分子生物學研究和實驗的常規方法,并沒有嚴格的凈化要求,但是為了避免各個試驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排是氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。

    試劑貯存和準備區:
    該實驗區主要進行的操作作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經過其它區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。對氣流壓力的控制,本區并沒有嚴格的要求。

    標本制備區:
    該區域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。本區的壓力梯度要求為相對于臨近區域為正壓,以避免從鄰近區域進入本區的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區域內不必要的走動。

    擴增反應混合物配制和擴增區:
    擴增反應混合物配制和擴增區:該區域主要進行的操作為NDA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可以在本區域內進行。在巢氏PCR測定中,通常在第一輪擴增后必須打開反應管。因此巢氏擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區域內進行。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區域漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。

    擴增產物分析區:
    該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區域可不設。本區是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于臨近區域為負壓,以避免擴增產物從本區域擴散至其它區域。

    完備的實驗室配套設施:
    完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、生物安全柜、離心機、加樣器等。

    分子生物學實驗室規劃設計

    實驗室凈化工程設計主要是通過人為的手段,應用潔凈技術實現控制室內空氣中塵埃、含菌濃度、溫濕度與壓力、以達到所要求的潔凈度、溫濕度和氣流速度等環境參數??諝鉂崈舳仁侵笣崈艨諝猸h境中空氣含塵量程度,空氣潔凈度的級別以含塵濃度劃分。潔凈度是指每升空氣中所含粒徑≥0.5um的塵粒的總顆粒。
    實驗潔凈室一般實施兩級隔離,一級隔離通過生物安全柜、負壓隔離器、正壓防護服、手套、眼罩等實現;二級隔離通過實驗室的建筑、空調凈化和電氣控制系統來實現。但由于凈化空調需要風量小為了安全起見,風量都按大的估算,一般都要超過規范規定,物別是百級以上,冷熱負荷在要求不是很嚴格的情況可能估算,現在專門有凈化空調機組,可以直接利用。二級~四級生物安全實驗室應實施兩級隔離。一般實驗室裝備有:超凈工作臺、生物安全柜、邊臺或不銹鋼操作臺、洗滌臺等。

    以PCR實驗室為例(PCR即聚合酶鏈式反應),是分子生物學研究和實驗的常規方法,也是生物學、醫學臨床等領域廣泛應用的實驗技術。其特點是能將微量的DNA大幅增加,實驗室通常分為四個區域,即:試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增反應混合物配制和擴增區、擴增產物分析區(如使用全自動分析儀,區域可適當合并)。進入各個區域必須嚴格按照單一方向進行,不同的工作區域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開時,不得將工作服帶出。

    實驗室潔凈裝修,試劑儲存和準備室(標本制備區),儀器主要配置有:冷凍離心機、生物安全柜、冰箱、可移動紫外燈、全自動力核酸蛋白純化儀、專用工作服和工作鞋等。擴增反應混合物配制和擴增區配置有:冰箱、高速離心機、超凈工作臺、PCR儀(要求負壓狀態)、可移動紫外燈、微量加樣器、核酸擴增儀等。擴增產物分析區主要配置有:移液器、振蕩器、超凈工作臺、毛細管電泳儀、冰箱、離心機、微量加樣器、可移動紫外燈等。

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